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日本IBL診斷新品：人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgAⅠ)酶聯試劑介紹：

半乳糖缺乏的IgA1(Gd-IgA1)作為IgA腎疾病發病機制和進展的關鍵效應分子受到越來越多研究的關注，在過去，人們采用HAA凝集法進行的實驗研究表明，IgA腎疾病患者血清中的Gd-IgA1的水平顯著高于健康人群或非IgA腎疾病的病人。但是由于多聚糖識別活性的不穩定性，HAA凝集法不適用于大規模研究中的大量樣本檢測，日本IBL研發的試劑盒使用能夠特異性識別Gd-IgA1的鉸鏈序列的單克隆抗體，能夠定量檢測人血清血漿中的Gd-IgA1。同時由于它的穩定，可適用于大規模的研究中。
Gd-IgAⅠ酶聯診斷試劑數據：

產品預期用途

本產品僅供科研用，不用于臨床診斷。

此IBL試劑盒能用于人血清和EDTA-血漿Gd-IgA1（半乳糖缺乏型IgA1）的定量檢測。

檢測靈敏度 (0.488 ng/mL)，檢測范圍 (1.56-100ng/mL)。

檢測原理

該人半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgAⅠ）酶聯試劑是固相夾心ELISA（酶聯免疫吸附測定法）。將第一抗體包被酶標板，加入樣品和標準品帶反應孔中，作為第一次反應。反應后，加入HRP-結合的二抗進入板孔進行第二次反應。洗去二次抗體后，將四甲基聯苯胺（TMB）加入到反應孔中并顯色。

檢測樣本

人血清和EDTA-血漿。

儲存條件

2-8℃保存，有效期見試劑盒外包裝。

試劑盒成分

1  預包被板：包被有抗Gd-IgA1（KM55）大鼠IgG              96T x 1

2  酶標記抗體：

   (30倍濃縮)HRP標記小鼠抗人IgA）                         0.2mL x 1

3  標準品：             人IgA1                             0.3mL x 2      

4  EIA緩沖液：                                             30mL x 1

5  標記抗體稀釋液：                                         6mL x 1

6  顯色劑：                                                 15mL x 1

7  終止液：                                                 12mL x 1

8  濃縮洗滌液：                                             50mL x 1

實驗操作步驟

準備

1. 洗滌液的準備

試劑盒的洗滌液是一種40倍濃縮液，應稀釋為1X洗滌液進行洗板用。如用1950 mL稀釋50 mL的濃縮洗滌液，制成2000mL即用稀釋洗滌液。

2. 酶標記抗體的準備

試劑盒中的標記抗體是一種30倍濃縮物，根據所需量用標記抗體稀釋液稀釋。稀釋后的標記抗體才能用于檢測步驟。

3. 標準品的準備

加0.3 mL的去離子水到瓶裝標準品中充分溶解，制成200ng/mL的標準品液，該溶液可凍存，但應避免反復凍融。

標準品的稀釋

準備7支試管，并每支各加120 μL EIA緩沖液。

將200ng/mL的標準品120ul加入到試管-1中混勻，制成100ng/mL的標準品，再取100ng/mL的標準品120ul到試管-2中混勻，制成50ng/mL的標準品，以此類推，做2倍倍比稀釋，制成100—1.56 ng/mL的標準品系列。